شناسایی گونه های ساریستیس در گوسفندان ذبح شده کشتارگاه شهر نهاوند به روش PCRRFLP .PCRRFLP

شناسایی گونه های ساریستیس در گوسفندان ذبح شده کشتارگاه شهر نهاوند به روش PCR-RFLP

 

دارای 130 صفحه وبا فرمت ورد وقابل ویرایش می باشد

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

چکیده هدف:. ساریستیس از شاخه اپی کمپلکسا است که زندگی دو میزبانه اجباری دارد. علف خواران (میزبانواسط) با خوردن آب و غذای آلوده به اسپروسیست ها که توسط (گوشت خواران) میزبان اصلی دفع می شود، آلودهمی شوند و متعاقب آن کیست های نسجی در احشاء ایجاد می شود. هدف از مطالعه حاضر شناسایی گونه هایبوده است. PCR-RFLP مختلف ساریستیس گوسفندان با استفاده از روشمواد و روش ها: در مطالعه حاضر مجموعاً 50 نمونه بافتی از عضلات مری و دیافراگم از گوسفندان ذبح شده درنمونه ها با DNA کشتارگاه نهاوند جمع آوری شد که حاوی کیست های ماکروسکوپی و میکروسکوپی بود. تخلیص18 بهینه شد. برای تعیین گونه s rRNA برای تکثیر قطعه PCR استفاده از کیت صورت گرفت. شرایطساریست های تحت مطالعه، با توجه به موقعیت محل برش آنزیم های برش دهنده، اقدام به انتخاب آنزیم شد.روی نمونه ها نشان داد که اکثر PCR-RFLP نتایج: نتایج نشان داد که آغازگرها کاملاً اختصاصی بوده اند. ارزیابیکیست ها متعلق به بافت دیافراگم و در جنس ماده بوده است. کیست های میکروسکوپی متعلق به ساریستیس آریتیکنیس و ساریستیس تنلا است.گونه های ساریستیس میکروسکوپی و ماکروسکوپی PCR-RFLP نتیجه گیری: با استفاده از آغازگرها برمبنای روشگوسفندی را می توان از هم تفکیک داد.

 

 

 

چکیده

 

 

 

فصل اول :مقدمه و کلیات

 

-1-1 مقدمه 2

 

-2-1 تاریخچه 2

 

-3-1 ویژگی های انگل 3

 

-4-1 اصطلاحات . 4

 

-5-1 طبقه بندی تک یاخته 5

 

-6-1 تاکسونومی اپی کمپلکسا . 6

 

-7-1 ساختمان اپی کمپلکسا. 6

 

-8-1 نام گذاری ساریستیس 7

 

-9-1 چرخه زندگی ساریستیس 10

 

-10-1 بیماری زایی ساریستیس در میزبانان واسط . 14

 

-11-1 بیماری زایی ساریستیس در میزبانان نهایی 15

 

-12-1 بیماری زایی و علائم در انسان15

 

-13-1 ضایعات کالبدگشایی . 15

 

-14-1 نشانه های بالینی 16

 

-15-1 اپیدمیولوژی 17

 

-16-1 کنترل 17

 

-17-1 تشخیص ساریستوزیس 18

 

-18-1 ایمنی 20

 

-19-1 درمان 20

 

-20-1 بیان مسئله . 21

 

-21-1 اهداف ویژه 22

 

فصل دوم :مروری بر ادبیات تحقیق و پیشینه تحقیق

 

-1-2 ساریستوزیس در ایران . 24

 

-2-2 وضعیت ساریست در جهان 26

 

فصل سوم :مواد و روش اجرای تحقیق

 

-1-3 جمع آوری و آماده سازی کیست ها . 30

 

-2-3 روش هضمی . 30

 

32 DNA -3-3 استخراج

 

34. PCR -4-3

 

37 RFLP -5-3 افزودن آنزیم های برش دهنده برای

 

شده . 38 RFLP -6-3 الکتروفورز نمونه های

 

فصل چهارم: نتایج

 

-1-4 نتایج روش هضمی . 40

 

40. PCR -2-4 نتایج

 

40. RFLP -3-4 نتایج

 

فصل پنجم: بحث 

 

-1-5 بحث . 45

 

-2-5 پیشنهادات . 50

 

منابع و مآخذ . 51

 

فهرست جداول 

 

1- پراکندگی گونه های ساریست در حیوانات اهلی . 10 - جدول 1

 

1- پرایمرهای مورداستفاده در تکثیر ژنوم ساریستیس 34 - جدول 3

 

35 PCR 2- مراحل انجام - جدول 3

 

3- جایگاه برش آنزیم های محدودگر . 37 - جدول

 

فهرست تصاویر 

 

1- اووسیست های عفونی ساریستیس 4 - تصویر 1

 

2- اووسیست ساریست . 4 - تصویر 1

 

3- ساریست های ماکروسکوپی در مری 5 - تصویر 1

 

4- کیست های ماکروسکوپی ساریست در دیافراگم . 5 - تصویر 1

 

5- ساختمان تک یاخته های خانواده اپی کمپلکسا . 7 - تصویر 1

 

6- چرخه کلی تک یاخته ساریت . 11 - تصویر 1

 

7- چرخه زندگی ساریستیس کروزی در گاو 12 - تصویر 1

 

8- چرخه زندگی ساریست 13 - تصویر 1

 

1- نمونه شاهد از مری دارای کیست های ماکروسکوپی . 30 - تصویر 3

 

2- مقدار 1.3 گرم پپسین وزن شده در آزمایشگاه . 31 - تصویر 3

 

3- صاف کردن نمونه هضم شده با گاز غیر استریل 3 لایه ای 31 - تصویر 3

 

در آزمایشگاه . 33 DNA برای استخراج Cinnagen 4- کیت - تصویر 3

 

5- سانتریفیوژهای استفاده شده در آزمایشگاه 33 - تصویر 3

 

6- دستگاه ترموبلاک . 34 - تصویر 3

 

35 PCR 7- مراحل انجام - تصویر 3

 

8- پودر آگار وزن شده در آزمایشگاه 36 - تصویر 3

 

37 10X TBE 9- بافر - تصویر 3

 

38 65 C در بن ماری در دمای TaqI 10 - آنزیم برش دهنده - تصویر 3

 

11 - لود شدن نمونه ها در الکتروفورز 38 - تصویر 3

 

18 که در آن قطعه 609 جفت 40 s rRNA ژن PCR 1-الکتروفورز محصول - تصویر 4

 

18 ساریستیس آریتی کنیس. 42 s rRNA ژن PCR 2-الکتروفورز محصول - تصویر 4

 

18 ساریستیس تنلا جداشده از گوسفند . 43 s rRNA ژن PCR 3-الکتروفورز محصول - تصوی

چکیدههدف:. ساریستیس از شاخه اپی کمپلکسا است که زندگی دو میزبانه اجباری دارد. علف خواران (میزبانواسط) با خوردن آب و غذای آلوده به اسپروسیست ها که توسط (گوشت خواران) میزبان اصلی دفع می شود، آلودهمی شوند و متعاقب آن کیست های نسجی در احشاء ایجاد می شود. هدف از مطالعه حاضر شناسایی گونه هایبوده است. PCR-RFLP مختلف ساریستیس گوسفندان با استفاده از روشمواد و روش ها: در مطالعه حاضر مجموعاً 50 نمونه بافتی از عضلات مری و دیافراگم از گوسفندان ذبح شده درنمونه ها با DNA کشتارگاه نهاوند جمع آوری شد که حاوی کیست های ماکروسکوپی و میکروسکوپی بود. تخلیص18 بهینه شد. برای تعیین گونه s rRNA برای تکثیر قطعه PCR استفاده از کیت صورت گرفت. شرایطساریست های تحت مطالعه، با توجه به موقعیت محل برش آنزیم های برش دهنده، اقدام به انتخاب آنزیم شد.روی نمونه ها نشان داد که اکثر PCR-RFLP نتایج: نتایج نشان داد که آغازگرها کاملاً اختصاصی بوده اند. ارزیابیکیست ها متعلق به بافت دیافراگم و در جنس ماده بوده است. کیست های میکروسکوپی متعلق به ساریستیس آریتیکنیس و ساریستیس تنلا است.گونه های ساریستیس میکروسکوپی و ماکروسکوپی PCR-RFLP نتیجه گیری: با استفاده از آغازگرها برمبنای روشگوسفندی را می توان از هم تفکیک داد.